Что можно называть обогащенной тромбоцитами плазмой?
Если трактовать термин дословно, то обогащенная тромбоцитами плазма – это плазма, концентрация тромбоцитов в которой превышает нормальную. В норме концентрация тромбоцитов в крови колеблется между 150 тыс./мкл и 350 тыс./мкл и в среднем составляет 200 тыс./мкл. Научно доказано, что стимулирующий эффект обогащенной тромбоцитами плазмы проявляется, если концентрация тромбоцитов в ней равна 1.000.000/мкл. Поэтому, на настоящий момент обогащенной тромбоцитами плазмой называют обогащенной тромбоцитами плазмой, если концентрация тромбоцитов в ней равна 1.000.000/мкл. При меньшей концентрации стимулирующий эффект не проявляется.
На рынке, как компании, так и отдельные исследователи продвигают значительное количество устройств, для получения БоТП. Практикующему врачу следует помнить, что БоТП должна иметь концентрацию тромбоцитов не менее 1 млн./мкл, быть стерильной и апирогенной. Наконец, тромбоциты в БоТП должны быть жизнеспособными.
Для выделения тромбоцитов из нативной крови, центрифуга должна работать в два этапа. На первом этапе эритроциты отделяются от плазмы и лейкоцитов с тромбоцитами. Во время второго этапа происходит окончательное разделение плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов с незначительным количеством эритроцитов на БоТП и бедную тромбоцитами плазму (наличие небольшого количества эритроцитов в БоТП неизбежно, потому что молодые и наиболее активные тромбоциты находятся вместе с самой легкой фракцией эритроцитов. Последние и придают БоТП красную окраску. Тромбоциты сами по себе имеют соломено-желтую окраску. – примеч. пер.). При одноэтапном разделении крови истинной БоТП не образуется. Вместо этого получается смесь богатой и бедной тромбоцитами плазмы с крайне низкой концентрацией тромбоцитов. Независимо от скорости вращения центрифуги и времени центрифугирования разделение эритроцитов и тромбоцитов за один этап невозможно. Это замечание для тех, кто собирается приобрести лабораторную центрифугу или ее модификацию для получения БоТП. Такие центрифуги предназначены для ДИАГНОСТИЧЕСКИХ целей, а не для получения БоТП. Они не дают значительного увеличения концентрации тромбоцитов, повреждают последние при выделении, не одобрены FDA, в некоторых из них используются пирогенные материалы. Так что такие центрифуги использовать не следует.
Выбор антикоагулянтов достаточно велик. Несмотря на это, только два из них могут поддерживать метаболизм тромбоцитов и обеспечивать выделение последних, не повреждая их. Цитратный антикоагулянт с декстрозой (ACD-A) наиболее предпочтителен.
Обогащенная тромбоцитами плазма может быть приготовлена только из несвернувшейся крови. Ее нельзя приготовить из свернувшейся цельной крови, из которой обычно получают сыворотку, потому что большая часть тромбоцитов остается в образовавшемся сгустке. Также ОТП нельзя приготовить из сыворотки, которая представляет собой прозрачную жидкость, полученную из цельной свернувшейся крови и освобожденной от клеток и белков, участвующих в процессе свертывания. Сыворотка содержит очень небольшое количество тромбоцитов. Кровь, для приготовления ОТП отбирают в емкость с цитратом натрия, который связывает ионы кальция, тем самым блокируя весь каскад свертывания. Далее следует стадия центрифугирования, которая проводится в один или два этапа. При первом центрифугировании плазма и тромбоциты отделяются от эритроцитов и лейкоцитов. Эритроциты (диаметр 7 мкм) и лейкоциты (диаметр 7-15 мкм) намного крупнее и тяжелее тромбоцитов (диаметр 2 мкм) и легко разделяются. Второе центрифугирование проводится более мягко и в результате ОТП концентрируется; в супернатанте остается бедная тромбоцитами плазма.
Следущим важным шагом является активация и агрегация тромбоцитов, приводящее к выбросу всех биологически активных факторов, содержащихся в тромбоцитах.
